1. 서 론
화석연료의 대체에너지로 주목받고 있는 바이오디젤은 경유와 비 슷한 연소특성을 가지는 지방산에스터 혼합물이다[1-2]. 바이오디젤 은 독성이 없고, 미생물 분해가 가능하며, 연료로서 연소될 때 환경오 염을 야기하는 가스의 배출량이 적다는 장점을 가지고 있다[3-4]. 그 러나 주로 식물성 기름으로부터 제조되는 바이오디젤은 생산단가가 높고, 부산물의 제거과정이 필요하며, 반응속도가 느려 제조과정의 최 적화가 필요하다[5-6]. 따라서 본 연구에서는 반응속도가 빠른 마이크 로웨이브 반응시스템을 이용하여 폐식용유의 산가(acid value)와 제조 조건에 따른 바이오디젤 전환특성을 반응표면분석법(response surface methodology, RSM) 중 Box-Behnken 설계(Box-Behken design model, BBD)를 적용하여 최적화하였다. 마이크로웨이브 반응시스템은 마이 크로웨이브파를 유전율이 큰 극성용매에 조사하여 빠르게 온도를 상 승시키는 방법으로 예열단계가 필요 없어 효과적이다. 따라서 마이크 로웨이브 가열방식은 전통적인 가열방식에 비해 짧은 시간 내에 가열 되어 높은 수율의 바이오디젤을 제조할 수 있다[7]. 또한 Box- Behnken 설계는 실험계획법 중 하나로 최소의 실험으로 최대의 정보 를 도출하여 공정을 최적화하는 방법이다[8-9]. Figure 1은 변수가 3개 일 때, Box-Behnken 설계의 변수설정을 나타내었다. 3변수에서 Box- Behnken 설계는 중심합성계획모델(central composite design model, CCD)과 다르게 높은 반응치와 낮은 반응치를 나누어 결과값의 경향 성을 보지 않는다[10]. 하지만 각 변수들의 중간점을 설계점으로 이용 한다. 이것은 점유형으로 나타내면 중심점은 점유형 0, 각 변수의 높 은 점과 낮은 점 밑 중간점은 2이다. 점유형 0은 모두 같은 조건의 반 복실험으로 모두 비슷한 결과 값을 나타내야 실험의 신뢰도가 높다고 할 수 있다. 점유형 2의 경우 모든 다른 변수를 제시하며 전체적인 각 변수가 반응치에 어떤 영향을 미치는지 독립적으로 혹은 혼합적으로 예측할 수 있다. 실험에 영향을 주는 인자(factor)인 독립변수로 메탄 올/유지 몰비, 마이크로웨이브 조사세기, 반응시간으로 설정하고, 각 인자가 반응치(response, y)인 지방산 메틸에스터함량(fatty acid methyl ester content, FAME content)에 미치는 영향을 해석하고, 독립적인 영 향인 주효과도(main effect)와 2개 이상의 인자가 혼합되어 반응에 미 치는 영향인 교호효과도(interaction effect) 등을 해석하였다. 각 독립 변수와 반응치인 FAME 함량의 2차 회귀방정식은 다음의 식으로 나 타낼 수 있다.(1)
여기서 y는 FAME 함량, cnn는 서로 다른 상수이며, x1은 메탄올/유 지 몰비, x2는 마이크로웨이브 조사세기, x3은 반응시간이다.
2. 실험방법
2.1. 마이크로웨이브를 이용한 바이오디젤 제조
바이오디젤의 제조를 위해 산가가 1.30, 2.00 mg KOH/g인 콩기름 원료 폐식용유를 사용하였다. 산가란 유지 1 g이 함유한 glyceride로서 결합 형태로 있지 않은 유리지방산을 중화하는데 필요한 KOH의 mg 수이다. 산가는 유지의 보존, 가열 등에 의하여 변하는 변수로서 유지 및 유지를 함유한 식품의 품질판정에 필요한 항수이며, 특히 유지의 산패 정도를 나타내는 기준이 되는 값이다.
마이크로웨이브를 이용한 바이오디젤 제조공정은 폐식용유 50 g에 알칼리 촉매인 KOH를 유지의 1.0 wt%로 메탄올에 용해시킨 후, 메탄 올/유지 몰비를 4~12로 하여 제조하였다. 마이크로웨이브 조사장치 (MARS-2, 1,000 W, 2,450 MHz, SINEO Microwave Chemistry Technology, China)의 마이크로웨이브 조사세기는 6~14 W/g이며, magnetic stirring을 이용하여 1,000 rpm으로 회전시켜 2~10 min을 반 응시켰다. 반응 후 글리세롤을 제거하기 위해 생성물을 분별깔때기에 넣어 층을 분리하고, 수세과정을 통해 미반응 및 잔여 알코올과 알칼 리 촉매를 제거하였다. 80 ℃로 재가열하여 수분을 제거하고 원심분 리 후 상층액인 바이오디젤을 분리하였다.
2.2. 바이오디젤의 FAME 함량 측정
제조된 바이오디젤의 FAME 함량은 기체 크로마토그래피(ACME 6100, HP, USA)를 사용하여 분석하였다. 내부표준물 분석법에 사용 된 표준물질은 methyl heptadecanoate (C17:0)이고, 분석컬럼은 HP-innowax column (L = 30 m, ID = 250 μm)을 사용하였다. 크로마토그램 의 분석결과를 이용하여 다음의 식을 이용하여 FAME 함량을 계산하 였다.(2)
여기서 은 지방산 메틸에스테르(C14:0~C18:3) 피크의 총면적 이고, m은 분석에 사용된 바이오디젤의 질량(mg)이다. 또한 AEI는 내 부표준물인 methyl heptadecanoate의 피크면적이고, CEI와 VEI는 각각 내부표준물의 농도(mg/mL)와 부피(mL)이다.
3. 결과 및 고찰
3.1. 기초실험을 통한 변수설정
Box-Behnken 설계의 경우 변수범위는 결과값이 변곡점을 나타내는 범위를 설정해야 한다. 따라서 본 연구에서는 각 독립변수인 반응시 간(5 min), 마이크로웨이브 조사세기(10 W/g), 메탄올/유지 몰비(8)을 기준으로 독랍변수에 따른 FAME 함량을 측정하여 Figure 2에 나타내 었다. 반응시간에 따라 제조된 바이오디젤의 FAME 함량을 분석한 결 과 반응시간 4~6 min까지 FAME 함량은 증가하다가 감소하였다. 반 응시간 2 min에서는 메탄올과 오일의 불완전한 전이에스테르화반응 으로 FAME 함량이 낮았으며, 반응시간 6 min 이후에서는 마이크로 웨이브 에너지에 의한 급격한 온도증가로 메탄올이 증발하여 오히려 FAME 함량이 감소하였다. 따라서 본 연구에서는 폐식용유의 산가에 관계없이 반응시간 범위를 4~6 min으로 설정하였다. 마이크로웨이브 조사세기의 영향을 분석한 결과 산가가 1.30 mg KOH/g인 폐식용유 의 경우 8~12 W/g의 범위에서 산가가 2.00 mg KOH/g인 폐식용유의 경우 10~14 W/g에서 FAME 함량의 증가/감소의 변곡점이 존재하였 다. 이는 마이크로웨이브 조사세기가 증가함에 따라 반응물의 온도가 급격히 증가하여 메탄올의 증발을 야기하기 때문으로 생각된다. 따라 서 본 연구에서는 산가범위에 따라 1.30 mg KOH/g인 폐식용유는 8~12 W/g, 2.00 mg KOH/g인 폐식용유는 10~14 W/g으로 Box- Behnken 설계의 변수범위를 설정하였다. 메탄올/유지 몰비에서는 폐 식용유의 산가가 감소함에 따라 FAME 함량이 높게 나타났다. 그리고 산가에 관련 없이 메탄올/유지 몰비가 6~10에서 FAME 함량은 증가 하다가 감소하여 변곡점을 가지게 된다. 이것은 너무 많은 메탄올은 오히려 에스테르화 반응을 방해하기 때문이다. 따라서 Box-Behnken 설계의 메탄올/유지 몰비는 6~10으로 설정하였다.
3.2. Box-Behnken 설계를 이용한 회귀방정식 분석
기초실험의 결과로부터 Box-Behnken 설계의 변수범위는 폐식용유 의 산가에 관계없이 메탄올/유지 몰비(6~10)와 반응시간(4~6 min)은 동일하게 설정하였으며, 마이크로웨이브 조사세기의 경우 산에 따라 1.30 mg KOH/g (8~12 W/g), 2.00 mg KOH/g (10~14 W/g)로 설정하 였다. Table 1은 Box-Behnken 설계에 의해 설정된 실험계획을 나타낸 표이다. Box-Behnken 설계의 경우 높은 반응치와 낮은 반응치의 조합 과 그 중간점에 의해 설계된다. 점타입으로 중간 반응치는 0, 높은 반 응치와 낮은 반응치의 조합과 그 중간점은 2로 표현된다. 점타입 0인 중간값의 경우 메탄올/유지 몰비, 마이크로웨이브 조사세기, 반응시간 를 모두 같은 값을 제시한다. 점타입 2인 높은 반응치와 낮은 반응치 의 조합과 그 중간점은 각각 정해진 곳에 표준순서대로 위치하게 된 다. Box-Behnken 설계는 15개의 실험 조건을 제시하며 이 중에 3개는 중간값으로 같은 실험조건을 제시하며 나머지 12개의 서로 다른 실험 조건을 제시한다. 중간값 조건에서 3번 반복실험을 수행함으로써 오 차를 통계화하고 신뢰성을 확보한다. 12개인 높은 반응치와 낮은 반 응치의 조합과 그 중간점은 각 변수의 조건을 모두 바꿈으로 변수에 따른 경향성을 파악한다.
Figure 3은 산가 1.30 mg KOH/g인 폐식용유를 사용하여 바이오디 젤을 제조할 때 Box-Behnken 설계에 의해 계산된 3차원 그래프와 등 고선도를 나타낸 그림이다. 3차원 그래프의 경우 하나의 요인의 최적 값을 대입하여 각 요인들이 FAME 함량에 미치는 영향의 경향성을 보여준다. 각 요인이 증가함에 따라 FAME 함량은 증가하다가 감소하 였다. 3차원 그래프를 통해 산출된 산가 1.30 mg KOH/g의 폐식용유 를 이용하여 제조된 바이오디젤의 FAME 함량에 대한 2차 회귀방정 식은 다음과 같다.(3)
여기서 x1은 메탄올/유지 몰비, x2는 마이크로웨이브 조사세기, x3는 반응시간이다. 회귀방정식을 통해 분산분석(analysis of variance, ANOVA)을 수행하여 결정계수(coefficient of determination, R2)와 P-value, F-value 등을 도출하였다. ANOVA 분석이란 동일실험을 여 러 번 반복하였을 때 측정치의 분산이 어떠한 요인에 의해 설명되는 지를 분석하는 방법이다[11]. 여기서 결정계수란 예측 값과 실제 값 사이의 관계를 나타내는 지표로써 0부터 1로 표현하며, 그 값이 클수 록 실험값과 예측값의 상호관계가 높은 것으로 해석된다. P-value란 실험값의 검정 통계량이 귀무가설을 지지하는 정도를 확률로 표현한 것이다. 따라서 P-value가 작을수록 귀무가설을 지지하는 정도가 약하 므로 귀무가설을 기각하게 된다. P-value (유의확률 값)가 유의수준보 다 작으면 귀무가설 하에 일반적인 형상이 아니므로 귀무가설을 기각 하고 대립가설을 채택하게 되며 일반적인 유의수준으로는 5%를 설정 한다. 또한 F-value란 분산 분석의 모형에 대한 적합성을 나타내며 값 이 클수록 적합하다고 볼 수 있다[12-13]. 각 독립변수의 P-value는 x1 < 0.001, x2 < 0.001, x3 = 0.011이며 메탄올/유지 몰비의 P-value가 가 장 작게 나타났다. P-value는 각각의 독립변수의 중요도를 확인할 수 있는 하나의 도구로써 그 값이 작을수록 더 중요한 독립변수로 판단 할 수 있다[14]. 따라서 본 연구의 메탄올/유지 몰비가 FAME 함량에 가장 큰 영향을 끼치며 주효과도가 가장 높다고 해석할 수 있다. 또한 교호효과도는 계량인자인 독립변수가 2개 이상일 경우 인자수준의 조 합에서 일어나는 효과를 나타낸다. (메탄올/유지 몰비×마이크로웨이 브 조사세기), (메탄올/유지 몰비×반응시간), (마이크로웨이브 조사세 기×반응시간)는 x1x2, x1x3, x2x3로 표현되며 그에 따른 교호효과는 P-value와 F-value로 해석된다. 3개의 교호효과 중 (메탄올/유지 몰비 × 마이크로웨이브 조사세기)의 P-value가 0.008로 가장 작았으며 F-value는 18.26으로 가장 크게 나타났다.
Figure 4는 산가가 2.00 mg KOH/g일 때 Box-Behnken 설계에 의해 요인들의 변화에 따라 반응치를 3차원 그래프와 등고선도를 나타낸 그림이다. 3차원 그래프의 경우 위에서부터 하나의 요인을 고정하여 그려진다. 고정 값은 위에서 구한 최적의 값을 대입하였다. 그래프는 최적화로 알 수 없는 각 요인들이 FAME 함량에 미치는 영향의 경향 성을 보여준다. 그래프의 휘어짐 정도로 요인인 반응치에 미치는 영 향은 반응시간이 가장 크고 메탄올/유지 몰비, 마이크로웨이브 조사세 기 순으로 크다. 그리고 산가가 1.30 mg KOH/g보다 그래프의 휘어짐 이 큰 것으로 보아 요인들이 반응치에 미치는 영향이 큰 것으로 보인 다. 식 (4)는 산가 2.00 mg KOH/g의 폐식용유를 이용하여 제조된 바 이오디젤의 FAME 함량에 대한 요인들의 주효과도와 교호효과도에 따른 반응치를 회귀방정식으로 나타내었다.
분산분석 결과 각 독립변수의 P-value는 x1 = 0.096, x2 = 0.0330, x3 = 0.103이며 메탄올/유지 몰비의 P-value가 가장 작게 나타났다. 따라 서 산가 2.00 mg KOH/g의 폐식용유의 경우 메탄올/유지 몰비가 FAME 함량에 가장 큰 영향을 끼치며 주효과도가 가장 높다고 해석 할 수 있다. 또한 교호효과도는 계량인자인 독립변수가 2개 이상일 경 우 인자수준의 조합에서 일어나는 효과를 나타낸다. (메탄올/유지 몰 비×마이크로웨이브 조사세기), (메탄올/유지 몰비×반응시간), (마이크 로웨이브 조사세기×반응시간)는 x1x2, x1x3, x2x3로 표현되며 그에 따른 교호효과는 P-value와 F-value로 해석된다. 3개의 교호효과 중(메탄올/ 유지 몰비 × 마이크로웨이브 조사세기)의 P-value가 0.100로 가장 작 았으며 F-value는 4.05로 가장 크게 나타났다.
3.3. 종합만족도 분석
Figure 5는 실험을 통해 얻은 반응치를 95% 신뢰구간 내의 확률도 를 나타낸 그래프이다. 그래프의 세 곡선은 왼쪽부터 순서대로 낮은 반응치, 중간 반응치, 높은 반응치를 나타낸다. 그리고 각 점은 실제 실험을 통해 얻은 반응치를 나타낸다. 대부분의 실험 반응치가 예상 반응치와 비슷한 값을 보이며 좁은 분포도를 보이게 되어 결과의 높 은 신뢰도를 확인할 수 있었다.
Figure 6은 각 산가에 대해서 회귀방정식을 통해 구한 공정의 최적 조건을 그래프로 나타내고 있다. 반응시간과 마이크로웨이브 조사세 기, 메탄올/유지 몰비가 증가함에 따라 FAME 함량은 증가하다가 감 소하는 모형을 보인다. 이 그래프는 위에서 살펴본 회귀방정식을 토 대로 그려졌으며, 그래프들의 조합으로 FAME 함량의 최댓값을 나타 내는 최적의 값을 보여준다. Box-Behnken 설계에 의해 산출된 산가 1.30 mg KOH/g의 폐식용유 원료 바이오디젤의 최적조건은 메탄올/유 지 몰수(7.58), 마이크로웨이브 조사세기(10.26 W/g), 반응시간(5.09 min)이고 이때 최적 FAME 함량은 98.4%이다. FAME 함량에 가장 큰 영향을 미치는 요인은 그래프의 최댓값 최솟값으로 비교할 수 있다. 메탄올/유지 몰비, 마이크로웨이브 조사세기, 반응시간 순으로 FAME 함량에 영향을 미치는 기여도 큰 것으로 보인다. 산가 2.00 mg KOH/g 의 폐식용유 원료 바이오디젤의 최적조건은 메탄올/유지 몰수(7.78), 마이크로웨이브 조사세기(12.18 W/g), 반응시간(5.09 min)이고 이 조 건에서의 FAME 함량은 96.3%이다. 산가변화에 따라 최적반응시간은 큰 변화가 없었지만 마이크로웨이브 조사세기는 상당히 증가하였고, 메탄올/유지 몰비 또한 증가하는 것으로 보인다. 따라서 메탄올/유지 몰비, 반응시간, 마이크로웨이브 조사세기 순으로 기여도가 크다고 볼 수 있다. 또한 산출된 최적조건 하에서 실제실험을 진행한 결과 0.3% 이하의 오차율을 나타내어 신뢰성을 확인할 수 있었다.
4. 결 론
본 연구에서는 반응표면분석법 중 Box-Behnken 설계를 이용하여 바이오디젤 제조 공정의 최적화 과정을 진행한 결과 다음과 같은 결 론을 얻을 수 있었다.
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마이크로웨이브를 이용하여 폐식용유를 바이오디젤로 제조하는 최적화 공정에서 FAME 함량에 영향을 미치는 변수의 범위를 측정하 기 위해 기초실험을 진행하였다. 계량인자로는 메탄올/유지 몰비, 마 이크로웨이브 조사세기, 반응시간으로 설정하였다. Box-Behnken 설 계의 변수범위는 폐식용유의 산가에 관계없이 메탄올/유지 몰비 (6~10)와 반응시간(4~6 min)은 동일하게 설정하였으며, 마이크로웨 이브 조사세기의 경우 산에 따라 1.30 mg KOH/g (8~12 W/g), 2.00 mg KOH/g (10~14 W/g)로 설정하였다.
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Box-Behnken 설계의 계량인자는 기초실험을 통하여 구한 변수 범위에서 실행하였다. 그 결과 FAME 함량에 대하여 각 요인들이 영 향을 미치는 주효과도, 교호효과도를 회귀방정식을 통해 알아보았다. ANOVA 분석 결과 산가에 상관없이 P-value가 가장 작은 메탄올/유 지 몰비의 주효과도가 FAME 함량에 가장 큰 영향을 끼치며, 교호효과도 에서는 (메탄올/유지 몰비 × 마이크로웨이브 조사세기)가 가장 큰 F-value를 나타내어 FAME 함량에 가장 큰 영향을 끼친다고 분석하였다.
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Box-Behnken 설계에 의해 산출된 산가 1.30 mg KOH/g인 폐식 용유의 경우 바이오디젤 최적조건으로 메탄올/유지 몰비(7.58), 마이 크로웨이브 조사세기(10.26 W/g), 반응시간(5.1 min)으로 산출되었고, 이때 FAME 함량은 98.4%이다. 또한 산가 2.00 mg KOH/g의 경우 메 탄올/유지 몰비(7.78), 마이크로웨이브 조사세기(12.18 W/g), 반응시간 (5.1 min)이고, 이때 FAME 함량은 96.3%이다. 실제로 실험을 진행하 여 오차율을 계산한 결과 0.3% 이하로 계산되어 신뢰성을 확인할 수 있었다.